注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
?
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
Sodium 4-amihippurate1,2,4-*苯 Standard for GC，≥99.5% (GC)硫酸 AR,95-98%（）

Tryptamine硫代米氏酮 AR硫酸 99.999% metals basis

Tyramine hydrochloride鄰苯二甲 Standard for GC, ≥99.5% (GC)發(fā)煙硫酸 AR

IDA維多利亞藍(lán)B 高純級(jí)，80%銻 USP, 99.0-103.0%

GPDA維多利亞藍(lán)B Biological stain二酮  ≥99.0%(GC)

Pentagastrin二甲酚橙四鈉鹽 AR甲基異丁(MIBC)  99%

HBTU鋅試劑 AR甲基異丁酮  for HPLC, ≥99.5%

L-Homoarginine hydrochloride鋅試劑 ≥85%（HPLC）苯乙烯 99%,含10-15ppm 4-叔-丁基鄰苯二酚穩(wěn)定劑

Zinc Glycinate3,3'4,4'-二苯甲酮四羧酸二酐 96%合聯(lián)氨  AR,80%溶液

Magnesium Glycinate1,4,5,8-萘四甲酸酐 96%胡椒 CP,99.0%（易制）

Calcium Glycinate六氟鋯酸 45%溶液六偏磷酸鈉 AR

3-Amibutaic acid堿式碳酸鋯(IV) ≥40% ZrO2 basis5-氨基喹啉 99%

DL-3-Amiisobutyric acid偏硅酸鈉，五 95%4-溴代三苯胺 97%

2-Amiisobutyric Acid零偏硅酸鈉 SiO2, 44-47% 4,7-二羥基-1,10-菲羅啉 98.0%

DL-Arginine HC1偏硅酸鈉，九 AR4,4′-二壬基-2,2′-聯(lián)吡啶 98.0%

L-Arginine L-aspartate salt偏硅酸鈉，九 CP4,4′-二壬基-2,2′-聯(lián)吡啶 98.0%

2,4-二硝基氯苯標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.00mg/ml,基體：甲)Asymmetric Dimethyl-SMARCC1/BAF155 (Arg1064) (D4F2L) Rabbit mAb (ChIP Specific)PARP (N-Terminus)  多腺苷二磷酸多聚酶抗體(N端)

標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,溶劑：甲)PEA-15 AntibodyPARP  多腺苷二磷酸多聚酶抗體/多聚ADP-核糖聚合酶1

2,3-二氯甲苯(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-FADD (Ser194) Antibody (Human Specific)PARL  骨骼肌細(xì)胞線(xiàn)粒體膜蛋白PARL抗體

2,5-二氯甲苯(標(biāo)準(zhǔn)品)CD28 (CD28.2) Mouse mAb (PE Conjugate)Parkin protein/PARK2  帕金蛋白抗體

3,4-二氯苯胺(標(biāo)準(zhǔn)品)FADD Antibody (Human Specific)PARG1/Rho GTPase activating protein 29  Rho GTP酶激活蛋白29抗體

3,3-二氯聯(lián)苯胺(標(biāo)準(zhǔn)品)FADD Antibody (Human Specific)PARD6B  缺陷性分配同源物β抗體

直接藍(lán)6(標(biāo)準(zhǔn)品)Pyruvate Dehydrogenase AntibodyPAR6  缺陷性分配同源物α抗體

分散橙37(標(biāo)準(zhǔn)品)GLUL (D2O3F) Rabbit mAb (IHC Formulated)PAR4  蛋白酶激活受體4抗體

鄰苯二甲酸二苯酯(標(biāo)準(zhǔn)品)INCENP (A841) AntibodyPAR4  蛋白酶活化受體4抗體

二甲基二氯化錫(標(biāo)準(zhǔn)品)Lck (73A5) Rabbit mAbPAR3  非典型蛋白激酶C特定相互作用蛋白抗體
瑟氏泰勒蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格4-Chloro-3,5-dinitrobenzotrifluoride,99%通用試劑　5G

3,5-Dinitrobenzotrifluoride,99%通用試劑　5G

5-Chloro-2-nitrobenzotrifluoride,99%通用試劑　5G

4-Chloro-3-nitrobenzotrifluoride,97%通用試劑　25G

3-Nitrobenzotrifluoride,97%通用試劑　25G

2,4-Dichlorobenzotrifluoride,98%通用試劑　25G

2-Chlorobenzotrifluoride,99%通用試劑　100G

1-Bromo-2,3-dimethylbenzene,99%通用試劑　5G

1-Iodo-3-nitrobenzene,99%通用試劑　25G

1-Bromo-4-ethylbenzene,97%通用試劑　10G

1-Bromo-4-propylbenzene,99%通用試劑　5G

1-Bromo-2-nitrobenzene,98%通用試劑　10G

Mesityl Iodide,98%通用試劑　5G

2-Fluoroiodobenzene,99%通用試劑　5G

1,4-Bis(trifluoromethyl)benzene,98%通用試劑　5G
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。