?
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
Niobium(V) oxide4-溴吡啶鹽酸鹽 98%亞鈉 CP（）

Tantalum3-溴苯胺 98%仲丁胺 99%

Tantalum4,4'-聯(lián)吡啶 98%N,N-二甲基乙胺 99%

Tantalum(V) oxideN,O-雙(*基硅烷基)三氟 96%異佛爾酮二胺 99%

Dysprosium(III)oxide3-丁炔-2- 97%乙酰乙酸基烯酸乙酯 95%

Erbium(III)oxide3-丁炔-1- 97%2,2-雙(羥甲基)酸 98%

Europium(III)oxide1,4-雙(*基硅烷基)-1,3-丁二炔 98%1，4-丁二 AR,98%

Gadolinium(III)oxide雙(三苯基膦)氯化鎳(Ⅱ) 98%1,3-丁二 99%

Lanthanum oxide雙(頻哪合)二 98%醋酸丁酸纖維素 30-35%

Neodymium trifluoride叔丁基二甲基硅烷基三氟磺酸酯 98%1,4-環(huán)己烷二甲（順+反異構(gòu)體混合物） 99%

Neodymium oxide3-溴吡啶 98%一縮二 99%

Praseodymium(III) oxide苯并呋喃 99%二乙氨基乙 99%

Samarium oxide芐基氯甲基 60%N,N-二甲基乙酰胺  ≥99.8%

Scandium oxide3-溴-5-乙?；拎?97%N,N-二甲基乙胺 CP,98.0%  

Thulium oxide2-溴-5-硝基吡啶 98%正癸酸 CP，98%

Yttrium oxide3-溴-5-羥基吡啶 97%二甲基二甲氧基硅烷 97%

對(duì)茴香酸(>99.0%(GC)(T))Fyn AntibodyIntegrin alpha L/CD11a  整合素αL抗體

9-蒽羧酸(>97.0%(GC)(T))Fyn AntibodyIntegrin alpha E2  整合素alpha E2 抗體

2-蒽甲酸(>98.0%(GC)(T))Desmin AntibodyIntegrin alpha E/CD103  整合素αE抗體

4-溴苯甲酸(>98.0%(GC)(T))Phospho-NF-κB p65 (Ser536) (93H1) Rabbit mAb (Biotinylated)Integrin alpha 7/ITGA7  整合素α7抗體

4-溴苯甲酰氯(>98.0%(GC)(T))α-Parvin AntibodyIntegrin alpha 6  整合素α6抗體

4-氯苯甲酰氯(>98.0%(GC)(T))Phospho-AMPA Receptor 2 (GluA2) (Tyr876) AntibodyIntegrin alpha 5/CD49e/ITGA5  整合素α5抗體

4-基苯甲酸(>98.0%(GC)(T))Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (violetFluor™ 450 Conjugate)Integrin alpha 4+Beta 7  整合素α4β7抗體

4-基苯甲酰氯(>98.0%(GC)(T))Phospho-SATB1 (Ser47) AntibodyIntegrin alpha 4/CD49d  整合素α4抗體

4-二甲氨基苯甲酸(>98.0%(HPLC)(T))E2F4 (E3G2G) Rabbit mAbIntegrin alpha 3/CD49c  整合素α3抗體

5-(4-甲氧羰基苯基)-10,15,2-三苯基卟吩(>90.0%(HPLC))Phospho-SMC1 (Ser360) AntibodyIntegrin Alpha 3 + Beta 1  整合素α3β1抗體(Integrin α3β1)
丁型肝炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒價(jià)格半乳糖轉(zhuǎn)移酶7亞基β1,4抗體Hesperetin中文名：橙皮素別名：分子式：C16H14O6

Bcl2相關(guān)抗凋亡基因6抗體Robtin中文名：別名：分子式：C15H12O6

組蛋白相關(guān)Bmi1抗體Anisofolin A中文名：別名：分子式：C39H32O14

溴脫氧尿苷單克隆抗體（增殖標(biāo)志物）3',4',7-Trimethoxyflavan中文名：別名：分子式：C18H20O4

腦特定蛋白Brn3B抗體Luteolin 7-O-glucoside中文名：木犀草苷別名：Cynaroside分子式：C21H20O11