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花生PCR檢測試劑盒說明書

產品簡介

花生PCR檢測試劑盒說明書
上海聯祖生物相關產品:
Pγ檢測試劑盒 優(yōu)化設計的實驗方案,1小時即可完成

更新時間:2021-03-13
訪問次數:523
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組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
注意事項:1.基礎程序;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數;5.PCR 反應液的配制;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學;8.PCR擴增產物;9.PCR反應體系與反應條件。

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 產品名稱

 花生PCR檢測試劑盒說明書

 規(guī)格

 50T

 貨號

 LZP7603

實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
枸櫞酸托瑞米芬C15H10O42-甲基-6-吡啶

枸櫞酸托瑞米芬(標準品)C14H8O4(2R)-1-[(9H-芴-9-甲氧基)羰基]六羥基哌啶-2-甲酸

異環(huán)酰C24H38O46-(1-甲基氧基)-吡啶甲

異環(huán)酰(標準品)C7H6O3普瑞巴林

鹽酸普拉克索C9H10O32-溴-1-(三氟甲氧基)基酮

鹽酸普拉克索(標準品)C9H10O3五

硫酸長春C6H6O2異氧基酸

硫酸長春(標準品)C8H8O42,6-二

硫酸長春(進分)C30H50O7-氧雜二環(huán)[4,1,0]庚烷-羧酸

替莫唑C20H19-基-6,7,8-三氟-1,二氫-氧代-喹啉甲酸酯

替莫唑(標準品)C30H45ClO62-溴代異丁酸甲酯

氨魯米特C44H70O232-氧基-2-氧基二

氨魯米特(標準品)C10H10O4氮雜吲哚-2-甲酸酯

氟他C13H10O56--甲基-4,5-二氨基嘧啶

氟他(標準品)C21H20O92,二氟甲酸甲酯

環(huán)酰C9H10O4溴-2-羥基吡啶

環(huán)酰(標準品)C9H6O45-溴-氟-2-羥基甲

醋酸地塞米松C16H18O9次硝酸鉍

蘋果酸脫氫酶(MDH)ELISA試劑盒Axin1  軸蛋白1100 ul

嘌呤核苷酸酸化酶(PNP)ELISA試劑盒Anei-ATX  自分泌運動因子100 ul

皮質酮/腎上腺酮(CORT)ELISA試劑盒Aurora A  有絲分裂激酶A100 ul

皮質(Cortisol)ELISA試劑盒Aurora B  有絲分裂激酶B100 ug

牛小腸性酸酶(CIAP)ELISA試劑盒Aurora C  有絲分裂激酶B100 ul

凝血因子XIII B(F13B)ELISA試劑盒Aurora A/B/C  有絲分裂激酶A/B/C100 ul

凝血因子XIII A1(F13A1)ELISA試劑盒B7-H1/CD274  程序性死亡配體1100 ul

凝血因子VIIIa輕鏈(F8aLC)ELISA試劑盒B7-DC/CD273  程序性死亡配體2100 ul

凝血因子Ⅻ(FⅫ)ELISA試劑盒ICOS-L/B7-H2/CD275  誘導協(xié)同刺激分子配體CD275100 ul
花生PCR檢測試劑盒說明書絲氨酸羧甲半胱氨酸合成酶抗體13-O-p-Coumaroylplumieride中文名:別名:分子式:C30H32O14

癌細胞高表達蛋白Hec1抗體Plumieride中文名:別名:分子式:C21H26O12

肝癌上調蛋白抗體6-O-Syringoylajugol中文名:別名:分子式:C24H32O13

HRAS樣抑制因子3抗體6-O-Cinnamoylcatalpol中文名:別名:分子式:C24H28O11

HEAT重復內含蛋白7A蛋白抗體Minecoside中文名:別名:6-O-trans-Isoferuloylcatalpol分子式:C25H30O13

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