組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

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實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
1,2,4,5-四(NMR定量標(biāo)準(zhǔn)品,99.8%(GC))Acetyl-Histone H2A (Lys5) Antibody2-氟-溴

熔點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)品(+235 to +237℃)Phospho-Histone H2A.X (Ser139) Antibody2-基-4'-甲基聯(lián)

1,(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Histone H2A.X (Ser139) Antibody1-Boc-羥甲基吡咯烷

二硫化四甲基秋蘭姆(標(biāo)準(zhǔn)品)Histone H2A Antibody II()戊二酸單酰

正己烷標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,基體：甲)GIRK2 (D6C2T) Rabbit mAb2-氟-吡啶

順式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Ribosomal Proin S3 Antibody(2R)-(-)-縮水甘油基對(duì)甲磺酸酯

二甲硝咪唑(標(biāo)準(zhǔn)品)MAGE-A3 Antibody4,6-二甲氧基-2-甲磺酰基嘧啶

N-(2-羥基)二-N,N′,N′-三酸 三鈉鹽 溶液(~41% in H2O (T))Keratin 5 (D4U8Q) Rabbit mAb4,4'-二甲基-2,2'-聯(lián)吡啶

青霉素V(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-Stat1 (Tyr701) (D4A7) Rabbit mAb (PE Conjuga)2,二氟芐基溴

2-NP-AOZ(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-IRS-1 (Ser332/336) Antibody基甲酸甲酯

磺醋酰(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-PP1α (Thr320) Antibody3,二氟肉桂酸

磺喹噁啉(標(biāo)準(zhǔn)品)SPAR (D9P9T) Rabbit mAb甲酸酯

磺吡(標(biāo)準(zhǔn)品)PP1α Antibody硫酸阿托品

泰妙菌素(標(biāo)準(zhǔn)品)GLI2 (R770) Antibody2,5-二對(duì)二甲

甲酸銨(用于質(zhì)譜,≥99.0%)IGFBP3 (D1U9C) Rabbit mAb2-溴噻唑-甲酸酯

甲(色譜級(jí), ≥99.5%(GC))PCNA (PC10) Mouse mAb2-羥基-甲基吡啶

甲基叔丁基(農(nóng)殘級(jí),≥99.9%(GC）)PCNA (PC10) Mouse mAb二氨基藍(lán) BB

甲基叔丁基(GC,≥99.9%(GC))TORC1/CRTC1 (C71D11) Rabbit mAb茉莉酸

B細(xì)胞活化因子(BAFF)ELISA試劑盒MuRF1/Trim63  肌肉細(xì)胞特異性泛素蛋白連接酶1100 ul

B細(xì)胞κ 輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子ε(NFKBIE)ELISA試劑盒MyD88  髓樣分化蛋白20 ul

B群鏈球菌多糖(IgG)ELISA試劑盒NIPP1/ARD1  核抑制蛋白酸酶1100 ul

B-淋巴細(xì)胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA試劑盒Myelin Proin Zero   外周髓脂P0蛋白/P0蛋白100 ul

B淋巴細(xì)胞抗原(CD20)ELISA試劑盒PMP2  周圍神經(jīng)髓鞘蛋白2100 ul

blca-4 ELISA試劑盒MYSM1  MYSM1100 ul

blca-1 ELISA試劑盒MYOZ/MYOZ1  MYOZ100 ul

Bcl-2樣蛋白1(BCL2L1)ELISA試劑盒MyoD1/Myf3  肌原調(diào)節(jié)蛋白100 ul

B7-H4 ELISA試劑盒SM Myosin (Smooth Muscle)  心肌肌凝蛋白(平滑肌) 單抗20 ul
小反芻獸RT-PCR檢測(cè)試劑盒廠家骨涎蛋白Chrysosplel D中文名：貓眼草酚別名：分子式：C18H16O8

腦和急性白血病胞漿蛋白抗體Sepil中文名：別名：分子式：C16H14O7

骨髓基質(zhì)干細(xì)胞抗原2抗體Fustin中文名：黃顏木素別名：Dihydrofisetin分子式：C15H12O6

環(huán)指蛋白47抗體Hydroxygenkwanin中文名：羥基芫花素別名：7-O-Methylluteolin分子式：C16H12O6

BEN結(jié)構(gòu)域蛋白5抗體Dihydrorobinetin中文名：別名：分子式：C15H12O7