產(chǎn)品名稱：食管癌細(xì)胞；ECA109
英文簡稱：ECA109，EC109細(xì)胞

貨號：LZ-X968531
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁生長

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8、酒精燈1臺；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
   6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通?？梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
4-哌啶酰粉紅擲孢酵母用途: 降解纖維素(degrades cellulose )

尼群地平球毛殼注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

四溴噻吩尖孢鐮刀菌拉丁屬名: Sphingomonas glacialis

四溴噻吩鞘氨單胞菌拉丁屬名: Bacillus  cereus

3-硝芐溴蠟狀芽孢桿菌拉丁屬名: Aspergillus foetidus

3-硝芐溴臭曲霉拉丁屬名: gallinarum

3-硝芐溴雞傷寒沙門氏菌用途: 共生固氮

2-硝溴化芐豌豆根瘤菌拉丁屬名: anatis

2-硝溴化芐鴨溫?fù)P球蟲拉丁屬名: Pleurotus  ostreatus

2-硝溴化芐糙皮側(cè)耳拉丁屬名: Sclerocleista ornata

LY364947華麗閉核菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

6-氟喹啉黑白铦囊蘑注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

(-)-(1S,4R)-坎烷酰老頭（梭柄蘑）拉丁屬名: Debaryomyces  hansenii var. hansenii

(-)-(1S,4R)-坎烷酰漢遜德巴利酵母漢遜變種拉丁屬名: Haematonectria haematococca

(R)-(-)-α-氧-α-(三氟)苯乙酰茄腐鐮刀菌拉丁屬名: 飲料  

(R)-(-)-α-氧-α-(三氟)苯乙酰飲料  注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用
ECA109，EC109細(xì)胞兔蛋白二硫化物異構(gòu)酶A2(PDIA2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒N-Boc-3-羥氮雜環(huán)丁烷鏈格孢拉丁屬名: Bacillus  subtilis

兔谷氨脫羧酶2(GAD2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒L-4-苯氨枯草芽胞桿菌拉丁屬名: Mucor spinosus

兔谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶μ2(GSTμ2/GSTm2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒L-4-苯氨囊毛霉拉丁屬名: Bacillus  subtilis

兔原卟啉(EPP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4--DL-苯氨酯鹽鹽枯草芽孢桿菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

兔轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(TNPO2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4--DL-苯氨酯鹽鹽金白F4(金針菇)注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

兔白介素13(IL-13)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2-(叔丁氧羰氨)-哌啶美澳型核果褐腐病菌拉丁屬名: Meyerozyma guilliermondii

兔內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1(ECE1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒2-(叔丁氧羰氨)-哌啶季也蒙邁耶氏酵母注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

兔八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子2(OBTF2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒3,5-二氟溴芐嗜熱脂肪芽胞桿菌拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

兔血小板衍生生長因子(PDGF)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒3,5-二氟溴芐釀酒酵母注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

兔伴刀豆球蛋白A(ConA)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  2,6-二氨吡啶木豆根瘤菌用途: 固氮。

兔乙酰膽酯酶關(guān)聯(lián)蛋白(ACHAP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒  2,6-二氨吡啶毛瓣雞血藤根瘤菌拉丁屬名: Sphingobacterium  sp.

兔巨噬炎性蛋白1β(MIP-1β)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 2,6-二氨吡啶鞘氨菌屬拉丁屬名: Fusarium solani

兔血小板衍生生長因子亞B(PDGFB)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Fmoc-Cys(Pmeobzl)-OH腐皮鐮孢注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

兔磷脂酶B(PLB)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒四硫銨平菇拉丁屬名: Chryseobacterium  flavum

兔磷脂酶D2(PLD2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒四硫銨黃色金黃桿菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

兔磷化外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒4-羥苯乙長根小奧德蘑拉丁屬名: Pichia subpelliculosa